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賽默飛Thermo熒光分光光度計的操作流程

更新時間:2024-09-09點擊次數(shù):1001

賽默飛(Thermo Fisher Scientific)的熒光分光光度計是一種用于測量樣品熒光特性的儀器,常用于分析生物分子、藥物、環(huán)境樣品和其他化學(xué)物質(zhì)。以下是其常規(guī)操作流程:

一、準(zhǔn)備工作

  1. 儀器檢查與開機

    • 確保熒光分光光度計已經(jīng)正確連接電源和計算機。

    • 打開儀器電源,等待儀器自檢和初始化完成。

    • 打開相應(yīng)的軟件(通常是Thermo Fisher的控制軟件)進行測量操作。

  2. 準(zhǔn)備樣品

    • 樣品的濃度和體積應(yīng)根據(jù)實驗需求進行適當(dāng)準(zhǔn)備。

    • 如果樣品需要稀釋,使用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ缛ルx子水、緩沖液等)進行稀釋,確保樣品熒光強度在檢測范圍內(nèi)。

  3. 清潔比色皿

    • 使用無塵擦紙擦拭比色皿,確保其表面無指紋或污漬。

    • 根據(jù)需要,選擇合適的比色皿(通常為石英比色皿,適合紫外和可見光區(qū)的測量)。

    • 用溶劑沖洗比色皿,避免樣品殘留。

  4. 選擇合適的激發(fā)和發(fā)射波長

    • 根據(jù)實驗需要或文獻參考,確定熒光激發(fā)波長和發(fā)射波長。

    • 在軟件中設(shè)置這些參數(shù)以進行測量。

二、操作步驟

1. 樣品與空白測量準(zhǔn)備

  • 空白樣品準(zhǔn)備

    • 空白樣品通常是與測量樣品相同的溶劑或緩沖液,用于校準(zhǔn)和消除背景干擾。

    • 將空白樣品注入比色皿,放入熒光分光光度計的樣品槽。

  • 測量空白

    • 在軟件中選擇“空白測量"功能,記錄空白的熒光信號。這一步是為了校正背景信號,確保后續(xù)測量的精確性。

    • 測量完成后,取出比色皿,清潔并準(zhǔn)備加入實驗樣品。

2. 樣品測量

  • 加入樣品

    • 將已準(zhǔn)備好的樣品注入清潔的比色皿,通常注入量為比色皿容積的2/3左右,避免過滿或過少。

    • 將比色皿放入熒光分光光度計的樣品槽,確保放置穩(wěn)固。

  • 設(shè)置測量參數(shù)

    • 在軟件中設(shè)定測量模式,如熒光光譜掃描、時間掃描或定量分析。

    • 設(shè)置激發(fā)波長和發(fā)射波長,確保選擇適合的熒光探針或標(biāo)記物的波長。

  • 測量

    • 點擊“開始測量"按鈕,儀器將自動激發(fā)樣品并采集熒光發(fā)射數(shù)據(jù)。

    • 數(shù)據(jù)會在軟件中實時顯示,包括熒光強度值及相應(yīng)的光譜圖。

3. 數(shù)據(jù)分析

  • 結(jié)果查看

    • 測量結(jié)束后,軟件界面會顯示熒光強度、峰值位置和其他相關(guān)數(shù)據(jù)。

    • 如進行光譜掃描,用戶可以查看整個光譜的發(fā)射曲線,找到最大熒光峰值的位置。

  • 數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出

    • 軟件通常允許保存測量結(jié)果和導(dǎo)出數(shù)據(jù),便于后續(xù)分析或?qū)嶒炗涗洝?/p>

    • 可將數(shù)據(jù)導(dǎo)出為Excel、PDF或圖形文件,以便進行進一步的分析或報告撰寫。

三、測量完成后的清理與關(guān)機

  1. 清理比色皿

    • 使用適當(dāng)?shù)娜軇┗蛉ルx子水清洗比色皿,避免樣品殘留污染下次測量。

    • 使用無絨紙或空氣吹干比色皿,確保干燥后存放。

  2. 清潔儀器樣品槽

    • 若不慎將樣品灑入樣品槽,用適當(dāng)?shù)牟潦眉堓p輕清理儀器內(nèi)部,避免損壞光學(xué)系統(tǒng)。

  3. 關(guān)機與儀器保養(yǎng)

    • 關(guān)閉軟件并保存所有數(shù)據(jù)。

    • 關(guān)閉熒光分光光度計電源,斷開電源插頭以確保安全。

    • 定期進行設(shè)備校準(zhǔn)和維護,確保儀器的長期準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

四、常見問題及解決方法

  1. 熒光信號過弱或無信號

    • 樣品濃度過低,考慮適當(dāng)增加濃度或延長激發(fā)時間。

    • 激發(fā)波長或發(fā)射波長選擇錯誤,確保選用合適的參數(shù)。

    • 比色皿清潔不,檢查比色皿表面是否有污漬影響光路。

  2. 熒光信號過強或超出范圍

    • 樣品濃度過高,建議稀釋樣品。

    • 減少激發(fā)光強度或降低PMT(光電倍增管)增益以避免飽和。

  3. 基線漂移或背景噪音高

    • 重新測量空白,確??瞻兹軇┲袩o熒光物質(zhì)干擾。

    • 檢查儀器內(nèi)部光學(xué)系統(tǒng)是否清潔,清理樣品槽。

五、總結(jié)

賽默飛熒光分光光度計操作簡單、功能強大,是生物化學(xué)分析中的工具。通過合理的準(zhǔn)備、設(shè)置與操作,科研人員可以獲得高質(zhì)量的熒光測量數(shù)據(jù),為各類分子分析和研究提供堅實的基礎(chǔ)。


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